《生化實(shí)驗(yàn)二--果蔬中總糖及還原糖含量的測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)第一部分果蔬成分的生化分析

1綜合實(shí)驗(yàn)一：果蔬成分的生化分析實(shí)驗(yàn)一果蔬中維生素C的定量測(cè)定（4學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)二果蔬中總糖及還原糖含量的測(cè)定（4學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)三果蔬中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定（4學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)四果蔬中過(guò)氧化物酶分析（12學(xué)時(shí)）

2實(shí)驗(yàn)材料：冬棗＋柚子——1～4組梨（2個(gè)品種）——5～8組盤菜＋蘿卜——9～12組

3實(shí)驗(yàn)二果蔬中總糖及還原糖含量的測(cè)定

4一、目的掌握總糖和還原糖含量的測(cè)定方法。學(xué)習(xí)分光光度計(jì)的原理和操作方法。

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6多糖為非還原糖，可用酸將沒(méi)有還原性的多糖和寡糖徹底水解成具有還原性的單糖，再利用還原糖的性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，這樣就可分別求出總糖和還原糖的含量。蒽酮比色法是一個(gè)快速而簡(jiǎn)便的定糖方法。其原理：糖類在較高溫度下可被硫酸脫水成糠醛或糠醛衍生物，再與蒽酮縮合成藍(lán)色化合物，在620nm處有最大吸收。

7三、實(shí)驗(yàn)器材1、植物材料2、吸管（1.0mL×2、5.0mL×2、0.1mL×2、0.2mL×2、0.5mL×2）3、試管（1.5cm×15cm×7）4、分光光度計(jì)5、水浴鍋、電爐6、電子分析天平7、容量瓶（100mL×1）、玻璃漏斗8、量筒、研缽、三角燒瓶

8四、實(shí)驗(yàn)試劑1、蒽酮試劑：取2g蒽酮溶于1000mL體積分?jǐn)?shù)為80%的硫酸中，當(dāng)日配制使用。2、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（0.1mg/mL）：稱取100mg葡萄糖，溶于蒸餾水并稀釋至1000mL（可加幾滴甲苯作防腐劑）。3、6mol/LHCl溶液4、20%NaOH溶液：稱取20gNaOH固體，溶于蒸餾水并稀釋至100mL。

9五、操作1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取潔凈試管6支，按下表進(jìn)行操作：012345標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液/mL00.10.20.30.40.5蒸餾水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中5min蒽酮試劑4.04.04.04.04.04.0煮沸10′，冷卻后室溫放置10′，在620nm處比色A620nm步驟管號(hào)

10以吸光度為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)液濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)做圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

112、樣品中還原糖的提取和測(cè)定稱取1g果蔬，加水約3mL，在研缽中磨成勻漿，轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，并用約30mL蒸餾水沖洗研缽2～3次，洗出液也轉(zhuǎn)入三角燒瓶中。于50℃水浴中保溫約0.5h（使還原糖浸出），取出，冷卻后定容至100mL。過(guò)濾后冰箱保存。冬棗、柚子、梨：取濾液1mL→100mL盤菜、蘿卜：取濾液10mL→100mL

12吸取1mL濾液置于試管中，浸于冰浴中冷卻，再加入4mL蒽酮試劑，沸水浴中煮沸10min，取出冷卻后比色，其他條件與做標(biāo)準(zhǔn)曲線相同。測(cè)得的吸光度值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查算出樣品液的糖含量。

133、樣品中總糖的提取、水解和測(cè)定稱取1g果蔬，加水約3mL，在研缽中磨成勻漿，轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，并用約12mL蒸餾水沖洗研缽2～3次，洗出液也轉(zhuǎn)入三角燒瓶中。再向三角燒瓶中加入6mol/L鹽酸10mL，攪拌均勻后在沸水浴中水解0.5h，冷卻后用20%NaOH溶液中和至pH呈中性。然后用蒸餾水定容至100mL，過(guò)濾后冰箱保存。

14冬棗、柚子、梨：取濾液5mL用蒸餾水定容至100mL。盤菜、蘿卜：取濾液10mL用蒸餾水定容至100mL。取總糖水解液1mL同上法進(jìn)行還原糖測(cè)定。

15六、計(jì)算按照下列公式分別計(jì)算果蔬中還原糖和總糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（w）。W（還原糖）＝×100%C1V1mW（總糖）＝×0.9①×100%C2V2m①乘0.9是為了從測(cè)定出的總糖水解成的單糖中扣除水解時(shí)所消耗的水量。

16式中：W（還原糖）：還原糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）W（總糖）：總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）C1：還原糖的質(zhì)量濃度（mg/mL）C2：水解后還原糖的質(zhì)量濃度（mg/mL）V1：樣品中還原糖提取液的體積（mL）V2：樣品中總糖提取液的體積（mL）m：樣品質(zhì)量

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