《南京大學(xué)生化實(shí)驗(yàn)一：總糖和還原糖含量的測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、總糖和還原糖含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)?zāi)康?植物體內(nèi)的還原糖，主要是葡萄糖、果糖和麥芽糖。它們?cè)谥参矬w內(nèi)的分布，不僅反映植物體內(nèi)碳水化合物的運(yùn)轉(zhuǎn)情況，而且也是呼吸作用的基質(zhì)。還原糖還能形成其他物質(zhì)如有機(jī)酸等。此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是堅(jiān)定其品質(zhì)的重要指標(biāo)。還原糖在有機(jī)體的代謝中起著重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，經(jīng)水解也生成還原糖。通過本實(shí)驗(yàn)，掌握還原糖定量測(cè)定的基本原理，練習(xí)比色定糖法的基本操作，熱悉分光光度計(jì)的使用方法。實(shí)驗(yàn)原理：1.還原糖還原糖是具有還原性的糖類的統(tǒng)稱。分子中含有游

2、離醛基或者酮基的單糖和含有游離醛基的二糖都具有還原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麥芽糖等。2.美拉德反應(yīng)美拉德反應(yīng)廣泛分布于食品工業(yè)中的非酶褐變反應(yīng)：還原糖與氨基酸/蛋白質(zhì)在加熱時(shí)發(fā)生的一系列復(fù)雜反應(yīng)，生成棕/黑色的大分子物質(zhì)，同時(shí)還產(chǎn)生具有不同氣味的中間體分子，包括還原酮、醛和雜環(huán)化合物，為食物提供誘人可口的風(fēng)味和誘人的色澤。3.還原糖的測(cè)定方法：3,5-二硝基水楊酸法第1頁(yè)共1頁(yè)在波長(zhǎng)540nm下，一定濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與光吸收值呈線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定樣品中的還原糖含

3、量。利用多糖能被酸水解為單糖的性質(zhì)可以通過測(cè)定水解后的單糖含量來(lái)對(duì)總糖進(jìn)行測(cè)定。4.Lambert-Beer定律A=lg(I0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光強(qiáng)度I：透射光強(qiáng)度T：透光度（透射比）K：比例常數(shù)l：溶液厚度實(shí)驗(yàn)儀器，試劑與材料：1.實(shí)驗(yàn)儀器：UV2600紫外可見分光光度計(jì)2.實(shí)驗(yàn)試劑：（1）1.0mg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖第2頁(yè)共2頁(yè)（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS試劑）（3）6mol/LHCl（張茜配置）（4）6mol/LNaOH（張茜配置）（5）碘-碘化鉀溶液3.實(shí)

4、驗(yàn)材料：市售面粉。實(shí)驗(yàn)步驟：1.還原糖的提取準(zhǔn)確稱取0.20g面粉，加蒸餾水約3ml，在研缽中磨成勻漿。，轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，用約30ml蒸餾水沖洗研缽2~3次，洗出液也轉(zhuǎn)入三角燒瓶中。于50℃恒溫水浴中保溫20min，不時(shí)攪拌，使還原糖浸出。將浸出夜（含沉淀）轉(zhuǎn)移到100ml離心管中，于4000r/min下離心5min，沉淀用20ml蒸餾水洗一次，再離心，將兩次離心的上清液合并，用蒸餾水定容至100ml，混勻，作為還原糖待測(cè)液。取1ml進(jìn)行還原糖的測(cè)定。2.總糖的水解準(zhǔn)確稱取0.50g面粉，加蒸餾水3

5、ml，在研缽中磨成勻漿后轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，并用12ml蒸餾水沖洗研缽2~3次，洗出液也轉(zhuǎn)入三角燒瓶中。再向三角燒瓶中加入6mol/LHCl10ml，攪拌均勻后在沸水浴中水解0.5h，取出1~2滴置于白瓷板上，加1滴I2-KI溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不顯藍(lán)色。水解完畢，冷卻至室溫后用6mol/LNaOH溶液中和至pH呈中性。然后用蒸餾水定容至100ml，過濾，取濾液10ml，用蒸餾水定容至100ml，成稀釋1000倍的總糖水解液。取0.5ml總糖水解液，測(cè)定其還原糖的含量。第3頁(yè)共3頁(yè)3.

6、還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作與樣品的測(cè)定數(shù)據(jù)記錄與處理：一．還原糖的提取面粉質(zhì)量：m1=0.20g二．總糖的提取面粉質(zhì)量：m2=0.50g6MHCl；6MNaOH（張茜配置）三．樣品的測(cè)定01234567標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖00.10.20.30.40.51.0ml還原糖0.5ml總糖水/ml提取液解液蒸餾水/ml1.00.90.80.70.60.500.5DNS試劑2.02.02.02.02.02.02.02.0/ml蒸餾水/ml4.04.04.04.04.04.04.04.0A540nm00.0870.2620.

7、4740.6630.8930.035/0.0300.297/0.263第4頁(yè)共4頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)曲線：回歸曲線為y=0.183x-0.0611)由第六組數(shù)據(jù)分析可知,還原糖提取液對(duì)應(yīng)的吸光度值為:(0.035+0.030)/2=0.032樣品還原糖含量為:X=(0.032+0.061)/0.183=0.508實(shí)驗(yàn)對(duì)象中還原糖的含量為:100X/200=25.4%2)由第七組數(shù)據(jù)分析可知,總糖提取液對(duì)應(yīng)的吸光度值為:(0.297+0.263)/2=0.280樣品總糖的含量為:X=(0.280+0.061)/0.

8、183=1.863實(shí)驗(yàn)對(duì)象中總糖的含量為:200X/500=74.5%第5頁(yè)共5頁(yè)注意事項(xiàng)：1.沸水浴時(shí)應(yīng)將試管口用保鮮膜封住，以防止水分蒸發(fā)引起體積誤差。2.應(yīng)該待反應(yīng)體系穩(wěn)定后進(jìn)行比色（約10min）。3.比色時(shí)，比色皿中盛放的溶液體積不應(yīng)過多，一般在2/3~3/4。4.比色時(shí)不能將溶液濺在儀器面板和儀器內(nèi)。5.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測(cè)定應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，一起顯色和比色。第6頁(yè)共6頁(yè)