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實驗十VC對酶法測定（CHOD-PAP法）膽固醇的干擾臨床生化教研室：雷燕鄒家瓊

1干擾試驗是測定實驗方法特異性誤差和干擾引起的誤差首先確定被試物質(zhì)是否引起誤差，再探討誤差的來源是方法特異性差還是干擾是衡量方法準確度的方法學評價試驗之一，在加入一定濃度干擾物的條件下,形成恒定誤差,干擾物濃度不同,誤差大小不同.

2目的要求掌握：干擾試驗的原理和用途熟悉：1.干擾試驗的設(shè)計與具體操作2.干擾值和干擾率的計算了解：注意事項和消除干擾的常用方法

3檢測原理干擾試驗對干擾物不作分析，只測定它對方法的干擾作用，以評價分析方法的準確性。干擾物產(chǎn)生的誤差屬恒定系統(tǒng)誤差，它的大小隨干擾物的濃度而異。常見干擾物有：血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素、肌酐、防腐劑、抗凝劑、藥物如VC等。

4本實驗選用VC做酶法測定（CHOD-PAP法）的干擾試驗，因VC可與CHOD催化生成的H2O2發(fā)生反應(yīng)，使第二步POD的偶聯(lián)反應(yīng)顯色強度減弱，產(chǎn)生負的測定誤差。檢測原理

5膽固醇酯+H2OCEH膽固醇+脂肪酸膽固醇+O2COD△4膽甾烯酮+H2O22H2O2+4-AAP+酚POD醌亞胺+4H2O特異性膽紅素、維生素C、尿酸、Hb負干擾

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8【試劑】1.試劑組成R1：酚12mmol／L膽酸鈉1.20mmol／L抗壞血酸氧化酶≥1.0KU／LPOD≥12.0KU／LR2：CEH≥1.0KU／LCOD≥0.5KU／L4-AAP1.20mmol／L

9樣品制備基礎(chǔ)樣品：血漿450ul+H2O50ul干擾樣品1：血漿450ul+濃度1VC50ul干擾樣品2：血漿450ul+濃度2VC50ul干擾樣品3：血漿450ul+濃度3VC50ul

10實驗操作取6支試管分別標明空白管、標準管、基礎(chǔ)樣品、干擾樣品1、干擾樣品2、干擾樣品3分別吸取相應(yīng)的樣本各10ul向各管加工作液1.0ml，混勻置37℃恒溫10min505nm波長測定各管的吸光度

11計算干擾率（％）＝(干擾值÷基礎(chǔ)值)×100％干擾值＝干擾管測定值干擾物加后濃度＝V干V總×干擾物加前濃度基礎(chǔ)管測定值

12干擾試驗的數(shù)據(jù)處理

13結(jié)果判斷當干擾物引起的偏差＜1/4總允許誤差（TEA）時，則不會影響測定結(jié)果的臨床應(yīng)用價值，可近似地認為當干擾物濃度低于該濃度時不影響測定結(jié)果。注明:TC的TEA：10％（參照美國CLI88標準）

14注意事項★加入量要準確?！锛尤胛矬w積應(yīng)只占很小的比例（小于1/10）?！锟梢筛蓴_物濃度，加入的干擾物的濃度明顯干擾常見濃度上限，尤其是達到病理標本最高值?！锓治鑫锶芤嚎墒褂脴藴室?，最好采用病人標本?！镌黾訙y定次數(shù)，減少隨機誤差。

15消除干擾的常用方法設(shè)立試劑空白和標本空白用物理或化學方法，除去干擾物雙波長或多波長檢測排除干擾誤差較大又無法消除，則需對方法進行改進或更換

16思考題1.什么是干擾試驗？怎樣理解干擾試驗是測定恒定系統(tǒng)誤差？2.為什么不能計算不同濃度下的平均干擾率？

17謝謝