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1、分析干擾試驗一.分析的干擾分析的干擾廣義上是指某一物質(zhì)對某分析物的濃度或催化活力測定屮任何一步驟的影響作用稱為分析干擾。很難區(qū)分清楚2個相互很近的詞義汗擾"(Interference)和“固有的特異性欠缺^(Inherentlackofspecificity)0分析物(Analyte)是標(biāo)本中準(zhǔn)備測定的組分。干擾物(Intcrfcrcnt)也是標(biāo)本屮的一個組分,它不是被分析物,但它改變最后的結(jié)果。干擾作用可看成是絕對的或相對的,絕對干擾作用是:一般病人標(biāo)本中不含有某物質(zhì),一旦它的存在即會引起干擾。相對干擾作用:一般病人標(biāo)本中含有某物
2、質(zhì),其含量相當(dāng)于混合樣品中的平均濃度,不同病人樣品中含該物質(zhì)的濃度變化引起干擾作用的變化。從實用考慮:相對的內(nèi)容在臨床實驗中更有意義。例如:在標(biāo)木中含有120g/L蛋白和正常標(biāo)木含有70g/L相比較確定貴白會引起干擾。這樣,純粹的干擾作用是50g/L而不是120g/L蛋白。在正常血清的基體中70g/L蛋白的作用是恒定的,相對于真正的分析物是系統(tǒng)的方法偏倚。常以空白測定和樣品的預(yù)處理來消除這樣的干擾所產(chǎn)生的恒定偏倚。用含有血清的校準(zhǔn)品作校準(zhǔn)及計算補(bǔ)償因子也是用來消除這類系統(tǒng)偏倚。干擾不涉及在分析前就使分析物濃度發(fā)生真實變化的作用,這些
3、作用可以是:?體內(nèi)藥物作用(如:因使用藥物后的生理響應(yīng)使激素濃度變化)。?標(biāo)本處理(由于蒸發(fā)、溶血或者血清和凝塊過長的不分離使電解質(zhì)、蛋白、水含量的改變)。?標(biāo)本收集[例如:在靜脈滴注時(內(nèi)含分析物)取樣]。這些作用可能會影響實驗結(jié)果的臨床應(yīng)用,但不能視作“分析干擾”。因為不管分析物原來如何,一個檢測系統(tǒng)或分析方法應(yīng)檢測標(biāo)木中所有的分析物。分析干擾所引起最終結(jié)果是人為的增加邙日性干擾)或減少(陰性干擾)。二.干擾物質(zhì)的來源:在標(biāo)本中的干擾物可分成內(nèi)源性和外源性;1.體內(nèi)某些病理條件下產(chǎn)生的(例如:膽紅素、脂肪、蛋白質(zhì)、血紅蛋白等);
4、2.在病人治療時攝入的(例如:藥物、非腸道維生素、血漿增溶劑、抗凝劑等);3.自我攝入(營養(yǎng)補(bǔ)充、饑餓過度、酒精或藥品中毒);4.由于標(biāo)本被污染(抗凝劑、防腐劑、血清分離器、收集、容器、塞子等);三.干擾的機(jī)理:山于某干擾物的存在以多種方式影響分析過程。1.物理作用:干擾物具有的物理性質(zhì),使它和分析物一樣被檢測和測定出來。如它的顏色、光散射(光吸收)、洗脫位置、電極響應(yīng)等。干擾物可能會改變標(biāo)本的物理特性:如表面張力、粘度、濁度、離子強(qiáng)度等,干擾檢測結(jié)果。2.化學(xué)作用干擾物可能會影響酶活力,例如:阻止金屬激活劑結(jié)合到活性屮心上去,氧化
5、必須的疏基等;干擾物也可破壞或阻止反應(yīng),例如:破壞試劑或抑止指示反應(yīng)。干擾物也可改變分析物的形式,例如:形成復(fù)合物或沉淀。3.非特異性干擾物可能和分析物以同樣的方式參與反應(yīng),例如:苦味酸肌肝方法中酮酸干擾,重氮膽紅素方法中U引味酚硫酸鹽的干擾。在免疫化學(xué)方法中干擾物可能和抗體發(fā)牛交叉反應(yīng)。例如:茶堿方法中咖啡因的干擾。干擾物可能催化某一反應(yīng),反應(yīng)結(jié)果屮和了底物。例如:腺昔激酶可在CK反應(yīng)中消耗底物ADP。1.水取代作用非水物質(zhì)(蛋白、脂質(zhì)),由于取代了血漿中部分水體積,影響了一些分析物的測定。這些作用考慮或不考慮為干擾作用,取決于要
6、求的結(jié)果是以總體積的濃度表示,還是以血漿水的濃度來表示。臨床要求較之分析原理更重要,須確定是否考慮取代作用是一個干擾,例如:用火焰光度法或間接電位法作Nf測定時,高脂血癥被考慮為是一種干擾。因為Na*在血漿水中的濃度在臨床上有重要懣義。四?臨床重要性:1.干擾對于總分析誤差有時是一個主要因素,每個病人結(jié)果和真值間的偏離可能有三個原因:1)系統(tǒng)偏差;2)不精密度;3)干擾。干擾實驗評價主要估計偏倚和不精密度的作用,干擾試驗通常受標(biāo)本條件所限,對實驗室技術(shù)人員而言通常是溶血、黃疸和脂血。2.干擾可視作系統(tǒng)的和隨機(jī)的。?對一個特別監(jiān)測的病
7、人而言,如干擾物總是以同一濃度存在的話,偏倚將是恒定的,偏倚隨干擾物濃度而改變。這種干擾是系統(tǒng)的。?對于一給定病人人群,由于干擾物濃度各異,由干擾物所形成的偏倚將是隨機(jī)的,而R顯著地作用于總隨機(jī)誤差,影響病人結(jié)果。無論何種情況,由一個干擾物引起的未預(yù)料作用可導(dǎo)致對實驗室結(jié)果解釋的嚴(yán)重誤丼。3.實驗室是克服這些問題的主要角色,可由:1)只使用對干擾物的敏感度不高和確定的方法。2)獲取資料,確定是否有干擾物質(zhì)存在于樣品。3)告訴醫(yī)生,由于有干擾存在,結(jié)果可能是不可靠的。廠商可提供給實驗室完整的有關(guān)干擾評價的結(jié)果文件,這是很好的資料來源。
8、五.實驗步驟的綜述:有兩種基本方法評價檢測系統(tǒng)或分析方法對干擾的敏感性。但每一種都冇內(nèi)在局限性,建議應(yīng)一起使用以相互補(bǔ)充。1.第一種方法是:將陽性干擾物加入臨床標(biāo)木的混合液(干擾測定樣品)中,和不加的同一混合液(干擾對照樣品)組比較有