《尼羅羅非魚Leptin A對(duì)能量穩(wěn)態(tài)的維持及調(diào)控機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、2018屆研究生博士學(xué)位論文分類號(hào)：學(xué)校代碼：10269密級(jí)：學(xué)號(hào)：52151300003論文題目：尼羅羅非魚LeptinA對(duì)能量穩(wěn)態(tài)的維持及調(diào)控機(jī)制研究院系：生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)：動(dòng)物學(xué)研究方向：水生動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)指導(dǎo)教師：陳立僑教授杜震宇教授學(xué)位申請(qǐng)人：劉才智2018年4月2018屆研究生博士學(xué)位論文分類號(hào)：學(xué)校代碼：10269密級(jí)：學(xué)號(hào)：52151300003EastChinaNormalUniversity博士學(xué)位論文DOCTORALDISSERTATION論文題目：尼羅羅非魚LeptinA對(duì)能量穩(wěn)態(tài)的維持及調(diào)控機(jī)制研究院系：生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)：動(dòng)物學(xué)研究方向：水生動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)指導(dǎo)教師：

2、陳立僑教授杜震宇教授學(xué)位申請(qǐng)人：劉才智2018年4月完成EastChinaNormalUniversity(10269)Dissertationfordoctoraldegreeof2018EASTCHINANORMALUNIVERSITYThemaintenanceandregulatorymechanismsofLeptinAinenergyhomeostasisofNiletilapia(Oreochromisniloticus)Name:CaizhiLiuStudentID:52151300003College:LifeScienceMajor:ZoologyResear

3、charea:AquacultureNutritionSupervisor:Prof.LiqiaoChen,Prof.ZhenyuDuApril2018劉才智博士學(xué)位論文答辯委員會(huì)成員名單姓名職稱單位備注莊平研究員東海水產(chǎn)研究所主席周歧存教授寧波大學(xué)/李家樂教授上海海洋大學(xué)/楊嘉龍研究員華東師范大學(xué)/杜震宇教授華東師范大學(xué)/中文摘要中文摘要在脊椎動(dòng)物中，Leptin因具有抑制食欲和促進(jìn)能量代謝從而維持機(jī)體能量穩(wěn)態(tài)的功能而被人們所熟知。肥胖個(gè)體易出現(xiàn)高血Leptin癥，并且外源性Leptin對(duì)其攝食和體重調(diào)控均失去了作用，這種現(xiàn)象被稱為L(zhǎng)eptin抵抗。在哺乳動(dòng)物中，Leptin抵

4、抗廣泛存在于由高脂飲食導(dǎo)致的肥胖個(gè)體中。然而，在發(fā)生Leptin抵抗的狀態(tài)下，Leptin對(duì)肥胖個(gè)體能量代謝的調(diào)控作用并不清楚。魚類作為地球上最早的脊椎動(dòng)物，其Leptin的生理功能應(yīng)具有進(jìn)化上的原始性和代表性。盡管如此，目前缺乏對(duì)魚類Leptin在能量穩(wěn)態(tài)中的調(diào)控作用和機(jī)制方面的研究，同時(shí)也不清楚魚類中是否存在Leptin抵抗以及Leptin在魚類肥胖個(gè)體中是否仍對(duì)能量代謝起著調(diào)控作用。本課題以尼羅羅非魚（Oreochromisniloticus）為研究對(duì)象，采用分子克隆、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫組化、蛋白印跡、組織學(xué)分析和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析等技術(shù)手段開展了如下研究：首先，對(duì)尼羅羅非

5、魚LeptinA基因進(jìn)行了克隆和組織表達(dá)定位研究，并且采用原核蛋白表純化技術(shù)獲得了尼羅羅非魚LeptinA的重組蛋白；其次，開展了不同營(yíng)養(yǎng)處理和LeptinA重組蛋白在體注射的實(shí)驗(yàn)來研究LeptinA對(duì)攝食調(diào)控和能量動(dòng)員分解代謝調(diào)控的作用和機(jī)制；最后，通過高糖和高脂飼料分別飼養(yǎng)尼羅羅非魚建立了兩種不同營(yíng)養(yǎng)背景的魚類肥胖模型，并對(duì)兩種肥胖模型的生理代謝特征進(jìn)行了全面的分析。在此基礎(chǔ)上，本研究對(duì)兩種肥胖模型LeptinA的表達(dá)水平、信號(hào)通路狀況和是否發(fā)生Leptin抵抗做了系統(tǒng)性的探究，并且進(jìn)一步對(duì)Leptin在兩種魚類肥胖模型能量代謝中是否仍存在調(diào)控作用做了深入研究。同時(shí)，本研究對(duì)

6、Leptin信號(hào)通路中的重要負(fù)反饋調(diào)控因子SOCS-3以及SOCS家族中的SOCS-1和SOCS-2進(jìn)行了克隆和轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析。論文的主要結(jié)果與結(jié)論如下：1.LeptinA基因克隆、組織定位和原核蛋白表達(dá)純化首個(gè)魚類Leptin基因的克隆要比哺乳類中晚了十多年。由于魚的種類豐富，在不同魚類中獲得Leptin基因是開展后續(xù)相關(guān)機(jī)制研究的最基本和首要的工作。I中文摘要本研究首先對(duì)尼羅羅非魚LeptinA基因的編碼區(qū)序列進(jìn)行了克隆，并對(duì)其氨基酸序列的同源性及蛋白三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行了比對(duì)分析。尼羅羅非魚LeptinA編碼區(qū)序列全長(zhǎng)486bp，編碼161個(gè)氨基酸，其中前20個(gè)氨基酸組成一段信號(hào)肽。

7、不同物種間Leptin的氨基酸序列同源性非常低，尼羅羅非魚LeptinA與人的Leptin相同氨基酸數(shù)僅為15.3%，但是不同物種間Leptin的蛋白三維結(jié)構(gòu)十分相近。已有的研究表明大部分魚類Leptin主要在肝臟中表達(dá)，而這些研究結(jié)果并沒有在蛋白水平上進(jìn)行驗(yàn)證。本研究通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR和LeptinA特異性抗體進(jìn)行免疫組化分析發(fā)現(xiàn)LeptinA在11種組織中都有表達(dá)，并且在肝臟中表達(dá)最高。意外的是LeptinA并沒有在皮膚中被檢測(cè)到而是在皮下脂肪中有大量的表達(dá)。本研究首次證