《2019高考生物二輪復(fù)習(xí)-專題九-現(xiàn)代生物科技專題-考點1-基因工程學(xué)案.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、考點1　基因工程1．基因工程的3種基本工具(1)限制性核酸內(nèi)切酶：識別特定核苷酸序列，并在特定位點上切割DNA分子。(2)DNA連接酶：①E·coliDNA連接酶只能連接黏性末端；②T4DNA連接酶能連接黏性末端和平末端。(3)載體：①能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在并大量復(fù)制；②有一個至多個限制酶切割位點；③具有特殊的標(biāo)記基因，以便對含目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選。提醒　(1)限制酶≠DNA酶≠解旋酶限制酶是切割某種特定的脫氧核苷酸序列，并使兩條鏈在特定的位置斷開；DNA酶是將DNA水解為基本組成單位；解旋酶是將DNA的兩條鏈間的氫鍵打開形成兩條單鏈。(2)使用限制酶的注意

2、點：a.一般用同種限制酶切割載體和目的基因；b.不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。(3)DNA連接酶≠DNA聚合酶DNA連接酶連接兩個DNA片段，而DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸添加到脫氧核苷酸鏈上。2．基因工程的操作流程(1)目的基因的獲取：①從基因文庫中獲取。②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。③化學(xué)方法人工合成。提醒　①PCR技術(shù)擴(kuò)增a．原理：DNA雙鏈復(fù)制。b．條件：模板DNA、引物、游離的脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶。c．過程②化學(xué)方法人工合成：已知核苷酸序列的較小基因，直接利用DNA合成儀用化學(xué)方法合成，不需要模板。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建——重組質(zhì)粒的構(gòu)建

3、①基因表達(dá)載體的組成②構(gòu)建過程提醒?、倩蚬こ讨械妮d體與細(xì)胞膜上的載體不同。②啟動子、終止子a．啟動子(DNA片段)≠起始密碼子(位于mRNA上)。b．終止子(DNA片段)≠終止密碼子(位于mRNA上)。③目的基因插入位置：啟動子與終止子之間。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞根據(jù)受體種類確定基因工程的受體細(xì)胞及導(dǎo)入方法。①植物：植物體細(xì)胞或受精卵——導(dǎo)入方法常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法、基因槍法(本法針對單子葉植物)。②動物：受精卵——導(dǎo)入方法為顯微注射法。③微生物：細(xì)菌——導(dǎo)入方法為感受態(tài)法。(4)目的基因的檢測與鑒定的方法①檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞：DNA分

4、子雜交技術(shù)。②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA：分子雜交技術(shù)。③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原—抗體雜交技術(shù)。④個體生物學(xué)水平鑒定：根據(jù)表達(dá)性狀判斷。3．蛋白質(zhì)工程1．(2018·全國Ⅰ，38)回答下列問題：(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)粒可以作為載體外，還證明了____________________________________________________________________________________________________

5、____________________________________________________(答出兩點即可)。(2)體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^Ca2＋參與的________方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞；而體外重組的噬菌體DNA通常需與______________組裝成完整噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞。在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是________。(3)真核生物基因(目的基因)在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解，在實驗中應(yīng)選用________________的大腸桿菌作為

6、受體細(xì)胞，在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加________的抑制劑。答案　(1)體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞；真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)　(2)轉(zhuǎn)化　外殼蛋白(或噬菌體蛋白)　細(xì)菌　(3)蛋白酶缺陷型　蛋白酶解析　(1)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌中，該過程利用的技術(shù)是基因工程。該研究除了證明質(zhì)?？勺鳛檩d體外，還證明了體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞，真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)等。(2)重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞可采用Ca2＋參與的轉(zhuǎn)化方法；體外重組噬菌體要通過將體外重組的噬菌體DNA和外殼蛋白(或噬菌體蛋白)進(jìn)行組裝獲得；因為噬菌體是專門寄生

7、在細(xì)菌中的病毒，所以宿主細(xì)胞選用細(xì)菌。(3)為防止蛋白質(zhì)被降解，在實驗中應(yīng)選用蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細(xì)胞；在蛋白質(zhì)純化過程中，為防止目的蛋白質(zhì)被降解，需要添加蛋白酶的抑制劑。方法技巧　(1)基因工程常用工具有3種——限制酶、DNA連接酶、載體；(2)常用載體有3種——質(zhì)粒、λ噬菌體衍生物、動植物病毒；(3)獲取目的基因有3種方法——基因文庫、PCR擴(kuò)增、人工合成；(4)常用3類受體細(xì)胞及導(dǎo)入方法：植物細(xì)胞——農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；動物細(xì)胞——顯微注射法；微生物細(xì)胞——Ca2＋處理轉(zhuǎn)化法。2．(2017·全國Ⅰ，38)真核生物基因中通常有內(nèi)含子，而原核生物基因中沒有

8、，原核生物