《產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌.doc》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、“生物制藥技術(shù)實(shí)訓(xùn)”課程研究報告班級：生物制藥081姓名：張靜學(xué)號：20087091105同組組員：方艷，胡書然，鄭磊贊項目一：產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌一實(shí)驗(yàn)原理枯草芽孢桿菌的多數(shù)中都能產(chǎn)生大量的淀粉酶，較易得到分離。由于芽孢具有較強(qiáng)的抗熱能力，分離純化時可采用熱處理的方法，高溫加熱處理，殺死樣品中所有不含芽孢的菌類，在培養(yǎng)過程中使芽孢桿菌得到很好的富集。利用該菌產(chǎn)淀粉酶的特性，選擇以淀粉為碳源的分離培養(yǎng)基，菌體分泌的淀粉酶會使菌落周圍的淀粉水解，滴加碘液即可在菌落周圍出現(xiàn)清晰的透明圈。根據(jù)透明圈的直徑（C）與菌落直徑（H）之比（C/H）可初步鑒定酶活力的高低，即比值越

2、大酶活力越高，進(jìn)而篩選出優(yōu)良的生產(chǎn)用菌。二材料滅過菌的種子培養(yǎng)基無菌生理鹽水（殺了菌的生理鹽水，鹽濃度0.9％）培養(yǎng)基配方：蛋白胨10g，酵母浸膏5g，NaCl10g，水1L，淀粉，1.8%的瓊脂PH7.2-7.4，121℃滅菌20min（各量取其三分之一）。三操作步驟1.包平板2.配生理鹽水3.根據(jù)培養(yǎng)基配方配置培養(yǎng)基，并取出45ml用于液體培養(yǎng)基，其余作為固體培養(yǎng)基4.取1，2，3中配成的平板，生理鹽水，大型三角瓶在121℃中滅菌20min75．稱取土壤10g與90mL無菌水中，振蕩20分，使土壤中菌體或孢子均勻分散，取其懸浮液于80℃下保持10min,以殺死非

3、芽孢的菌體。取5ml懸浮液接入到裝有45ml種子培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)，（于37℃、200r/min搖床中）培養(yǎng)20h6.滅完菌后倒平板，自然冷卻凝固后放入恒溫培養(yǎng)箱中靜致一夜，觀察其是否染菌7.將用于做梯度試驗(yàn)的試管8個，每個加9ml蒸餾水，移液管8個，塞棉花拿去滅菌121℃，20min8.取培養(yǎng)后的菌液，用無菌生理鹽水適當(dāng)稀釋，取一定量涂布于平板，做梯度試驗(yàn)分別標(biāo)記為100，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，10-9，10-10。9.將標(biāo)記的的試管，移取1ml與培養(yǎng)基中涂布并進(jìn)行標(biāo)記，于37℃，培養(yǎng)20h10.將滅菌好的平

4、板拿出，進(jìn)行無菌劃線，在培養(yǎng)基中觀察到10-8，10-9，10-10，有單一菌落，而10-6，10-7并不明顯，．對10-8，10-9，10-10的培養(yǎng)基中的菌落加碘液進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)有透明圈。711.在無菌操作下，用接種環(huán)挑取有透明圈較為明顯的菌落，于載玻片上，加入生理鹽水，在高倍鏡下進(jìn)行觀察，在觀察前對菌種用番紅進(jìn)行染色，是觀察較為容易。發(fā)現(xiàn)這次鏡檢的產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌較為清晰顯桿狀，這次我們認(rèn)定這應(yīng)該是我們所需菌種。12.對所認(rèn)定的這幾個培養(yǎng)基中的菌種進(jìn)行菌種純化，再配培養(yǎng)基，將菌種接種到培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20h。四實(shí)驗(yàn)結(jié)果培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)無雜菌，挑取菌落鏡檢，發(fā)現(xiàn)為桿

5、狀細(xì)菌777參考文獻(xiàn)：[1]張建云.α-淀粉酶原因的體外定向進(jìn)化研究[D]河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2004[2]李金霞.耐高溫α-淀粉酶基因的克隆、表達(dá)及突變[D]天津科技大學(xué),2004.[3]張強(qiáng).耐高溫α-淀粉酶產(chǎn)生菌的分離鑒定及發(fā)酵條件與酶學(xué)性質(zhì)研究[D]四川大學(xué),2005.[4]朱何東.高溫α-淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選及酶學(xué)性質(zhì)研究[D]四川大學(xué),2006.[5]杜承.產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶基因工程菌的構(gòu)建及酶學(xué)性質(zhì)研究[D]吉林大學(xué),2007.[6]趙子如.古菌SulfolobussofaltaricusP2嗜熱嗜酸淀粉酶基因的克隆和表達(dá)[D]南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.7生物制

6、藥0801張靜7