《大豆抗原蛋白血清抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、畜牧與獸醫(yī)2013年第45卷第1期·19·大豆抗原蛋白血清抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立孫志闊，王希春，石念進(jìn)，汪洋，鐘剛，徐同锏，劉芳芳，吳金節(jié)(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽合肥230036)摘要：旨在建立檢測(cè)血清大豆抗原蛋白抗體的間接ELISA方法。經(jīng)瓊脂糖凝膠層析純化大豆抗原蛋白，以不同劑量皮下注射免疫小鼠，采用方陣滴定法確定最佳抗原包被濃度及血清稀釋度，并對(duì)其他條件進(jìn)行優(yōu)化，最終建立檢測(cè)血清大豆抗原蛋白抗體的間接ELISA方法，利用該方法檢測(cè)小鼠免疫后血清抗體水平。通過(guò)方陣滴定法確定11S蛋白最佳包被濃度為5．0g／mL

2、，血清稀釋倍數(shù)為1：800；7S蛋白抗原最佳包被濃度為2．5g／mL，血清稀釋倍數(shù)為1：1600；兩者的批內(nèi)、批間系數(shù)均小于10％，重復(fù)性較好，通過(guò)ELISA法確定11s和7s蛋白的最佳免疫次數(shù)為2次，免疫劑量為1000g／kg。結(jié)果表明本試驗(yàn)初步建立大豆抗原蛋白抗體檢測(cè)間接ELISA方法，具有很強(qiáng)的特異性、敏感性和重復(fù)性，可用于大豆抗原蛋白過(guò)敏反應(yīng)的臨床檢測(cè)。關(guān)鍵詞：大豆抗原蛋白；純化；ELISA；抗體中圖分類(lèi)號(hào)：$813．24文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：0529—5130(2013)01—0019—06Developmentofan

3、indirectenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectingserumantibodiesofsoybeanantigenproteinSUNZhi—kuo，WANGXi—chun，SHINian-jin，WANGYang，ZHONGGang，XUTong-jian，LIUFang—fang，WUJin-jie(CollegeofAnimalScienceandTechnology，AnhuiAgriculturalUniversity，Hefei230036，China)Abstract：

4、Thestudyisaimedtodevelopanindirectenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)fordetectionofserumspecificantibod—iesofsoybeanantigenprotein．SoybeanantigenproteinswerepurifiedbyAgarosegelchromatographyandusedtoinjectKunmingmicewithdifferentdoses．AnindirectELISAwasdevelopedwit

5、hthepurifiedantigenproteinatdifferentconcentrations，andtheoptimalantigencon—centrationandserumdilutionweredeterminedbyphalanxtitration．Theotherworkingconditionswerealsooptimized．TheserumantibodylevelsofimmunedmiceweredetectedbytheestablishedELISA．Theoptimalcoatingconce

6、ntrationof11Sproteinandserumdilutionwere5．0g·mLand1：800，respectively．Theoptimalcoatingconcentrationof7Sproteinandserumdilutionwere2．5／xg·mLand1：1600，respectively．Bothintra—andinter—assayrepeatabilityofELISAwerelessthan10％．Theoptimalimmunetimesanddosesof11Sand7Sproteinw

7、ere2and1000g·kg～，respectively．ThedevelopedindirectELISAhadgoodspecificity，sensitivityandreproducibility．Thisstudyprovidesareliablemethodfortheclinicaldetectionofallergicreactionsinducedbysoybeanantigenprotein．Keywords：soybeanantigenprotein；purification；ELISA；antibody大豆

8、在我國(guó)普遍種植，具有價(jià)格便宜，蛋白質(zhì)含長(zhǎng)遠(yuǎn)的社會(huì)效益。因此，建立一種低廉、快速、簡(jiǎn)便量高等特點(diǎn)，是畜禽業(yè)生產(chǎn)中最主要的蛋白質(zhì)來(lái)源。的針對(duì)大豆抗原蛋白過(guò)敏反應(yīng)的診斷方法對(duì)畜牧業(yè)的然而，大豆中存在的抗原蛋白物質(zhì)能引起人和動(dòng)物尤發(fā)展具有十分