《KJ 201709 液體乳中黃曲霉毒素M1的快速檢測膠體金免疫層析法》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、附件3液體乳中黃曲霉毒素M1的快速檢測膠體金免疫層析法（KJ201709）1范圍本方法規(guī)定了牛奶、羊奶、牦牛奶等液體乳中黃曲霉毒素M1的膠體金免疫層析快速檢測方法。本方法適用于生鮮乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳中黃曲霉毒素M1的快速測定。2原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的黃曲霉毒素M1與膠體金標記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和試紙條或檢測卡中檢測線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線（C線）顏色深淺比較，對樣品中黃曲霉毒素M1進行定性判定。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。3.1試

2、劑甲醇。3.2參考物質(zhì)黃曲霉毒素M1參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥90%。表1黃曲霉毒素M1參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質(zhì)量黃曲霉毒素M1AflatoxinM16795-23-9C17H12O7328.27注：或等同可溯源物質(zhì)。3.3標準溶液的配制3.3.1黃曲霉毒素M1標準儲備液（100μg/mL）：精密稱取適量黃曲霉毒素M1標準品（3.2），置于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為100μg/mL的黃曲霉毒素M

3、1標準儲備液；或可直接購買黃曲霉毒素M1標準儲備液。-20℃避光保存?zhèn)溆?，有效?個月。—1——3.3.2黃曲霉毒素M1標準中間液（100ng/mL）：精密量取黃曲霉毒素M1標準儲備液（100μg/mL）（3.3.1）0.1mL，置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為100ng/mL的黃曲霉毒素M1標準中間液。臨用新制。3.4材料黃曲霉毒素M1膠體金免疫層析試劑盒，適用基質(zhì)為液體乳。3.4.1金標微孔（含膠體金標記的特異性抗體）。3.4.2試紙條或檢測卡。4儀器和設備4.1移液器：100μL、200μL和500μL。4.2渦旋混合器。4.

4、3電子天平：感量為0.01g。4.4環(huán)境條件：溫度15—35℃，濕度≤80%。5分析步驟5.1試樣制備取適量有代表性樣品充分混勻。5.2試樣提取和凈化以液體乳為基質(zhì)的樣品可直接上樣檢測或根據(jù)產(chǎn)品說明書稀釋后檢測。5.3測定步驟5.3.1試紙條與金標微孔測定步驟吸取100—200μL樣品待測液于金標微孔（3.4.1）中，抽吸5—10次使混合均勻，不要有氣泡，室溫溫育3—5min（根據(jù)配套說明書進行避光操作），將檢測試紙條（3.4.2）樣品端垂直向下插入金標微孔中，溫育5—10min，從微孔中取出試紙條，進行結(jié)果判定。5.3.2檢測卡與金標微孔測定步驟吸取100—200μ

5、L樣品待測液于金標微孔（3.4.1）中，抽吸5—10次使混合均勻，不要有氣泡，室溫溫育3—5min（根據(jù)配套說明書進行避光操作），將金標微孔中全部溶液滴加到檢測卡（3.4.2）上的加樣孔中，溫育5—10min，進行結(jié)果判定。5.4質(zhì)控試驗每批樣品應同時進行空白試驗和加標質(zhì)控試驗。5.4.1空白試驗稱取空白試樣，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。5.4.2加標質(zhì)控試驗—2——準確稱取空白試樣100g（精確至0.01g）置于100mL玻璃溶液瓶中，加入500μL黃曲霉毒素M1標準中間液（100ng/mL）（3.3.2），使試樣黃曲霉毒素M1含量濃度為0.5μg/kg，

6、按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。6結(jié)果判定要求通過對比控制線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進行結(jié)果判定。目視結(jié)果判讀如圖1。6.1無效控制線（C線）不顯色，表明不正確操作或試紙條/檢測卡無效。6.2陽性結(jié)果6.2.1消線法檢測線（T線）不顯色，控制線（C線）顯色，表明樣品中黃曲霉毒素M1含量高于方法檢測限，判定為陽性。6.2.2比色法檢測線（T線）顏色比控制線（C線）顏色淺或幾乎不顯色，表明樣品中黃曲霉毒素M1含量高于方法檢測限，判定為陽性。6.3陰性結(jié)果6.3.1消線法檢測線（T線）、控制線（C線）均顯色，表明樣品中黃曲霉毒素M1含量低于方法檢測限，判定為

7、陰性。6.3.2比色法檢測線（T線）顏色比控制線（C線）顏色深或者檢測線（T線）顏色與控制線（C線）顏色相當，表明樣品中黃曲霉毒素M1含量低于方法檢測限，判定為陰性。手持端C線消線法T線陰性陽性C線T線C線C線比色法T線T線陰性陽性加樣孔樣品端C線結(jié)果無效T線試紙條試紙卡檢測裝置示意圖—3——圖1試紙條/檢測卡目視判定示意圖6.4質(zhì)控試驗要求空白試驗測定結(jié)果應為陰性，加標質(zhì)控試驗測定結(jié)果應為陽性。7結(jié)論黃曲霉毒素M1與其他幾種黃曲霉毒素（黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素M2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2）有交叉，當檢測結(jié)果為陽性時，應對黃曲霉毒素M1結(jié)果