《炮制方法對延胡索生物堿含量及其鎮(zhèn)痛作用的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、炮制方法對延胡索生物堿含量及其鎮(zhèn)痛作用的影響綜合一體化實驗林親雄陳旅翼編寫一、實驗項目擬達(dá)到的學(xué)生訓(xùn)練目的或目標(biāo)1?掌握延胡索炮制方法、要點及原料；2.掌握延胡索生物堿成分及鎮(zhèn)痛藥理作用測定的方法；3.了解炮制前后延胡索牛物堿含量與鎮(zhèn)痛藥理作用變化的意義。二、實驗項目涉及的主要科學(xué)原理1.延胡索的炮制及增效原理：按照2010年版《屮華人民共和國藥典》延胡索項下的炮制方法、采用醋炙法炮制延胡索，壇強(qiáng)其行氣止痛作用。其冇效成分為難溶于水的生物堿，醋炙后可使生物堿成鹽，易于溶出。而生物堿又為其鎮(zhèn)痛有效成分。故醋炙后，延胡索的生物堿捉取率和

2、鎮(zhèn)痛作用均能增加。2.延胡索生物堿成分的IIPLC測定：延胡索的主要活性成分是生物堿類成分，具有顯著的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和催眠作用，對心律失常、胃潰瘍等多種疾病冇較好的臨床效果。通過HPLC方法比較分析醋炙前后延胡索主要牛物堿成分的變化，可為闡明醋炙增效理論捉供科學(xué)依據(jù)。3.鎮(zhèn)痛實驗原理：采用小鼠腹腔注射0.4%的酷酸溶液，引起扭體反應(yīng)；采用熱板法,引起舔后足反應(yīng)；設(shè)置空白組，陽性組、給藥組，以反映延胡索的鎮(zhèn)痛作用。三、實驗項目需要的主要器材1?實驗器具炒鍋、鍋鏟、煤氣灶、搪瓷盤、切約刀、標(biāo)準(zhǔn)篩（50目，即三號篩）、高效液相色譜儀、分析天平

3、（1/100000）、水浴鍋、容量瓶（10ml、5ml）、圓底燒瓶（50ml）、平底燒瓶（100ml）、移液管（25ml、50ml）、回流及回收裝置、燒杯、玻璃漏斗、錐形瓶、量筒、注射器、微孔濾膜、微量進(jìn)樣器、流動相過濾裝置、HPLC儀。臺式天平、燒杯（1000ml）、秒表、小鼠籠。2?實驗材料：延胡索、米醋、甲醇（分析純和色譜純）、濃氨水、0.1%磷酸、三乙胺、蒸憎水、生理鹽水、0.6%醋酸溶液、苦味酸（動物標(biāo)號用）延胡索乙素對照詁。3.實驗動物：健康成年ICR雄性小鼠（18?22g）o四、實驗內(nèi)容與方法1?延胡索的炮制（1）延胡

4、索預(yù)處理：取原藥材，除去雜質(zhì)，大小分開，洗凈，稍浸，潤透，切厚片，干燥，篩去碎屑，或洗凈、干燥后搗碎。（2）醋炙延胡索：取凈延胡索或延胡索片，稱重，加入定量的米酷拌勻，悶潤至醋被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，炒干，取出晾涼。稱重，計算得率。2醋炙前后延胡索主要生物堿成分的含量測定2.1醋炙前后延胡索總堿樣品的制備延胡索生品溶液的制備：取延胡索生品干燥塊莖20.0g,粉碎過篩，取4?0g藥材粉末用ph3.5（醋酸調(diào)）75%乙醇液120.0ml溶解，置于超聲波清洗機(jī)（40°C,500w）超聲40min,抽濾液，滲濾液減壓揮去乙醇（55

5、°C）,用蒸憾水定容至100ml,用10%氨水調(diào)ph至10.0o用乙?1:1萃取三次，合并乙瞇相，減壓揮干（40°C）,加20ml甲醇使溶解，最后定容至25mlo取已定容25ml乙瞇萃取物小的8ml蒸干，殘渣加加1甲醇超聲溶解，用0.45umJI濾即得樣品A。延胡索炮制品溶液的制備：同延胡索牛品溶液的制備。對照品溶液的制備：精確稱取原阿片堿、延胡索乙素、紫堇堿、四氫小槃堿四種對照品甲醇超聲溶解，用甲醇稀釋成lmg/ml的溶液。2.2HPLC色譜條件與系統(tǒng)實用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以卬醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH

6、6.0）（55：45）為流動相，檢測波長為281nmo理論板數(shù)按延胡索乙素峰計算應(yīng)不低于3000。梯度洗脫程序由學(xué)生自行探索。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和測定：將對照品溶液按照不同的比例進(jìn)行稀釋，精密吸取各不同稀釋倍數(shù)的對照品溶液各10",注入液相色譜儀，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法,進(jìn)行測定，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10",注入液相色譜儀,測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量。3.醋酸扭體法比較延胡索炮制前后的鎮(zhèn)痛作用（1）供試品溶液的制備取延胡索生品及醋炙品各25g,分別煎煮，第一次加水400ml,第二次加水250nd煎

7、煮2次，每次25分鐘，濾過，合并濾液，濃縮至50ml備用。(2)試驗方法取小鼠隨機(jī)分為3組，每組4只，分別灌以生理鹽水和延胡索生品供試液、延胡索醋炙品供試液0.2ml/10g,40分鐘后，各鼠腹腔注射0.6%醋酸0.lml/10g,注射后立即啟動秒表，記錄扭體潛伏期及0?15分鐘、15?30分鐘的扭體次數(shù)。1.熱板法比較延胡索炮制前后的鎮(zhèn)痛作用(1)供試品溶液的制備取延胡索生品及醋炙品各25幻分別煎煮，第一次加水400ml,第二次加水250ml煎煮2次，每次25分鐘，濾過，合并濾液，濃縮至50ml備用。(2)把小鼠放在事先加熱至55

8、°C土0.5°C的熱板測痛儀的金屬板上，熱板作為熱刺激，用秒表記錄口投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時間(S)作為該鼠的痛閾值。給約前先測定每只小鼠的痛閾值(共測定兩次，以平均值不超過30s者為合格)。取合格小鼠12只，稱重，均分為三組，分別灌