《莠去津高效降解菌降解途徑的研究及其降解基因的克隆》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、莠去津高效降解菌降解途徑的研究及降解基因的克隆中文摘要本文首先以莠去津高效降解菌HB-5為主要研究對(duì)象，研究了HB-5降解莠去津的能力及降解途徑；另外主要從本實(shí)驗(yàn)室已有菌株中又篩選到了一株能夠礦化莠去津的降解菌HB-6,研究了HB-6降解莠去津的能力及降解途徑，并對(duì)HB-6中含有的莠去津降解基因進(jìn)行了克隆。主要內(nèi)容如下：1.介紹了莠去津的理化性質(zhì)、國(guó)內(nèi)外應(yīng)用概況，以及由于其廣泛應(yīng)用所帶來的危害；對(duì)莠去津及其降解產(chǎn)物在環(huán)境介質(zhì)中的各種檢測(cè)方法進(jìn)行了闡述；在對(duì)前人工作總結(jié)分析的基礎(chǔ)上，對(duì)莠去津的降解途徑、降解基因及酶系進(jìn)行了全面系統(tǒng)的綜述，進(jìn)而提出了作

2、者要研究的問題。2．對(duì)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)篩選出的莠去津高效降解菌HB-5的降解途徑及降解-1能力進(jìn)行了研究。我們已經(jīng)知道HB-5能夠在24h內(nèi)將100mg·L的莠去津降解完全，并且通過基因克隆發(fā)現(xiàn)，HB-5含有基因TrzN、AtzB、AtzC。我們將HB-5加入到以莠去津?yàn)槲ㄒ坏吹臒o機(jī)鹽培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)，分別在0h、12h、24h、48h、72h、96h、120h取樣，通過液相色譜及HPLC-MS對(duì)HB-5降解莠去津的降解產(chǎn)物進(jìn)行分析，得到了HB-5對(duì)莠去津的降解能力及降解途徑。-1研究結(jié)果表明，在24h內(nèi)HB-5能夠?qū)⑤ソ颍?00mg·L）降

3、解完全，同時(shí)生成了羥基莠去津和氰尿酸。羥基莠去津在12h的時(shí)候生成量達(dá)到最大值約為20mg/L然后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸消失，于此同時(shí)氰尿酸的生成量-1-1約為96mg·L，然后氰尿酸的量逐漸增加至100mg·L左右，不再變化。用HPLC-MS測(cè)定HB-5降解莠去津后的降解產(chǎn)物，我們?nèi)?4h和96h樣品進(jìn)行液質(zhì)測(cè)定，在不同時(shí)間的培養(yǎng)液中我們檢測(cè)到了兩種降解產(chǎn)物，它們的離子大小分別為198(M/Z)和129(M/Z)。我們通過測(cè)定莠去津降解產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)樣品和莠去津的降解途徑可以得知，這兩種物質(zhì)分別為羥基莠去津、氰尿酸。通過液相色譜和液相色譜質(zhì)譜的聯(lián)用我們發(fā)現(xiàn)

4、，HB-5能夠?qū)⑤ソ蜃罱K降解至氰尿酸，而不能進(jìn)行下一步的降解。3.對(duì)實(shí)驗(yàn)室已有的菌株HB-1、HB-3、HB-6、HB-7、HW-23、WB-1進(jìn)行篩選，以氰尿酸為唯一氮源，測(cè)定它們對(duì)氰尿酸的降解能力，發(fā)現(xiàn)HB-6在24h內(nèi)對(duì)氰尿酸的降解率最高，所以選擇HB-6做下一步的實(shí)驗(yàn)。1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文另外，通過對(duì)這株細(xì)菌對(duì)莠去津的生理耐受能力及其降解能力的測(cè)定，發(fā)-1現(xiàn)HB-6可在莠去津含量為1000mg·L平板培養(yǎng)基生長(zhǎng)，而且在菌落的周圍形成一無色透明暈圈。4.我們將HB-6加入到以莠去津?yàn)槲ㄒ坏吹臒o機(jī)鹽培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)，分別在0h

5、、24h、48h、72h、96h、120h、144h取樣，通過液相色譜及HPLC-MS對(duì)HB-6降解莠去津的降解產(chǎn)物進(jìn)行分析，得到了HB-6對(duì)莠去津的降解能力及降解途徑。-1液相測(cè)定的結(jié)果為，在24h內(nèi)HB-6能夠?qū)⑤ソ颍?00mg·L）降解完全，同時(shí)生成了羥基莠去津和氰尿酸。羥基莠去津在12h的時(shí)候生成量達(dá)-1到最大值約為10mg·L然后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸消失，于此同時(shí)氰尿酸也-1達(dá)到它的最大值約60mg·L，然后隨著時(shí)間的推移羥基莠去津及氰尿酸逐漸被完全降解。我們用HPLC-MS測(cè)定HB-6降解莠去津后的降解產(chǎn)物，在不同時(shí)間的培養(yǎng)液中我們檢測(cè)

6、到了三種降解產(chǎn)物，它們的離子大小分別為198(M/Z)，129(M/Z)和60(M/Z)。我們通過標(biāo)準(zhǔn)樣品和莠去津的降解途徑可以得知，這三種物質(zhì)分別為羥基莠去津、氰尿酸和尿素。而且在144h培養(yǎng)液中無其它降解產(chǎn)物，只有尿素，這就充分說明HB-6能夠礦化莠去津。5.高效降解菌對(duì)莠去津的降解特性試驗(yàn)表明：培養(yǎng)溫度和pH條件對(duì)降解菌的生長(zhǎng)及其對(duì)莠去津的降解有很大的影響，適宜降解菌生長(zhǎng)及其對(duì)莠去津降解的溫度在20℃～40℃之間，pH在6.0～9.0之間；高濃度的莠去津?qū)到饩纳L(zhǎng)及降解能力有抑制作用。6.通過菌種的形態(tài)、生理生化實(shí)驗(yàn)及16SrDNA對(duì)降解

7、菌HB-6進(jìn)行了鑒定，并且與NCBI已有菌種進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果表明HB-6為枯草芽孢桿菌。7.對(duì)莠去津高效降解菌HB-6中的莠去津降解基因進(jìn)行了克隆。根據(jù)文獻(xiàn)中提供的引物序列為參考序列設(shè)計(jì)引物，以高效降解菌HB-6的總DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到HB-6中的莠去津降解基因分別為atzB、atzC和trzN，并對(duì)這些基因進(jìn)行了測(cè)序和序列比對(duì)。關(guān)鍵詞：莠去津降解途徑降解產(chǎn)物基因2莠去津高效降解菌降解途徑的研究及降解基因的克隆StudyontheAtrazineDegradativePathwayandAtrazine-degradingGenesin

8、AtrazineDegradingBacterialStrainsWangQiDirectedbyDr.ZhuLushen