《柑橘類植物ERF6和GRAS基因的低溫脅迫應(yīng)答及啟動子序列分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、密級碩士學(xué)位論文柑橘類植物ERF6和GRAS基因的低溫脅迫應(yīng)答及啟動子序列分析指導(dǎo)教師姓名、職稱郭里丕教援單位地址逝江痖菹太堂化堂皇生金科堂堂院申請學(xué)位級別亟±專業(yè)植物堂論文提交時間2Q!三生壘月論文答辯時間2Q!三生5旦學(xué)位授予單位和日期逝江!!巫菹太堂答辯委員會主席塍丞塞論文評閱入2013年4月COLDSTRESSRESPOINSEOFER所ANDGR4SGENEINSOM匣CITRUSPLANTSANDTHEIRPROMOTERSEQUENCEANALYSISADissertationinbotanyUndertheSupervisionofProfessor

2、GUOWeidongByYEJie‘一．IunZhejiangNormalUniversityJinhua,Zhejiang，China一一，April，2013本研究得到浙江省自然科學(xué)基金和浙江省科技計劃項目資助ThisresearchwasfundedbytheNaturalScienceFoundationofZhejiangProvince(Y307472)andScienceandTechnologyProjectsofZhejiangProvince(2008C22002)柑橘類植物ERF6和GRAS基因的低溫脅迫應(yīng)答及啟動子序列分析摘要低溫是影響經(jīng)濟作

3、物產(chǎn)量和品質(zhì)的主要環(huán)境因素之一。柑橘屬(Citrus)植物是我國的一類重要的經(jīng)濟作物，其用途非常廣泛，即可鮮食也可制藥。柑橘在我國的種植面積非常大，但由于是亞熱帶植物，耐寒性差，周期性的植物冷害嚴重制約了柑橘的栽培范圍。人們一直致力于利用轉(zhuǎn)基因育種等方法提高植物的抗寒能力。轉(zhuǎn)錄因子蛋白在植物的非生物脅迫應(yīng)答中起著重要的作用。ERF和GRAS是植物中所特有的兩類參與非生物逆境脅迫的轉(zhuǎn)錄因子。佛手、本地早、甌柑和處紅柚是四種耐寒性不同的柑橘屬植物，枳是與柑橘親緣關(guān)系很近的一個耐寒性很高的物種。本文以佛手、本地早、甌柑、處紅柚和枳的兩年生盆栽苗為試材，研究ERF6、GRA

4、S轉(zhuǎn)錄因子的表達差異與植株抗寒性能力強弱的關(guān)系，并在佛手中克隆這兩種轉(zhuǎn)錄因子的啟動子序列，初步分析其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。1．以兩年生佛手(CmedicaCV．Qingpi)、本地早(C．reticulataCV．Succosa)、甌柑(C．reticulataCV．Suavissima)、處紅柚(CmaximaCV．chuhongyou)和枳(Poncirustrifoliatel濉)盆栽苗為試材，經(jīng)不同溫度低溫脅迫24小時后，測定葉片的電解質(zhì)外滲率(REC)，進行植株抗寒性分析和低溫半致死溫度(LT50)的計算；在4℃低溫脅迫下設(shè)置不同的脅迫時間，測定葉片中丙二醛(MD

5、A)的含量，進行植株的抗寒能力強弱比較。結(jié)果表明：佛手等五種植株的電解質(zhì)外滲率隨溫度降低的上升幅度不同，但上升的趨勢線都呈S型曲線，佛手、本地早、甌柑、處紅柚和枳的低溫半致死溫度分別為．5．2℃、．8．6℃、一8．3℃、一6．6℃和．10．O℃；-4℃低溫脅迫下，隨著時間的延長五種植株的MDA含量都逐漸增加，但增加幅度不同；五種植株抗寒性強弱的順序在MDA含量測定和電解質(zhì)外滲率測定中所顯示的結(jié)果是一致，其抗寒性強弱順序為枳>本地早>甌柑>處紅柚>佛手，且抗寒性能力的差異也與所得的各品種的低溫半致死溫度差異相一致。2．以佛手、本地早、甌柑、處紅柚和枳的兩年生盆栽苗為試

6、材，4。C低溫脅迫處理不同時長，采用實時熒光定量PCR的方法檢測ERF6和GRAS基因在不同脅迫時間下的mRNA表達差異，分析五種植株中這兩種轉(zhuǎn)錄因子的表達差異和抗寒能力強弱的關(guān)系，明確ERF6和GRAS基因?qū)Ω涕兕愔参锏蜏孛{迫應(yīng)答的作用。結(jié)果表明：低溫脅迫下五種植株的ERF6和GRAS基因表達量均被誘導(dǎo)上調(diào)；佛手ERF6基因低溫脅迫12小時內(nèi)表達量呈上升趨勢，上升幅度為對照(0h)的4．3倍，12小時后表達量逐漸下降，48小時后恢復(fù)到對照水平；本地早、甌柑、處紅柚和枳ERF6基因均在36小時內(nèi)表達量上調(diào)，上調(diào)幅度分別為對照的61，62，6和316倍，36小時后表達

7、量下降；佛手、本地早和枳GRAS基因低溫脅迫36小時內(nèi)表達量上調(diào)，上調(diào)幅度分別為對照的9．6，408和1506倍，處紅柚和甌柑GRAS基因分別在12，24小時內(nèi)表達量增加為對照的16和1200倍。說明ERF6和GRAS基因表達量的上調(diào)與植株的低溫脅迫應(yīng)答反應(yīng)有關(guān)，基因表達量上調(diào)幅度的大小與植株的抗寒能力強弱呈正相關(guān)關(guān)系。3．以青皮佛手兩年生盆栽苗為試材，提取葉片基因組DNA，采用Tail．PCR的方法克隆轉(zhuǎn)錄因子ERF6和GRAS基因啟動子序列，并進行序列分析。根據(jù)已經(jīng)獲得的佛手ERF6基因eDNA全長序列和GRAS基因eDNA全長序列設(shè)計下游特異引物進行啟動子