《奧曲肽對人胃癌細胞增殖的抑制作用研究論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、奧曲肽對人胃癌細胞增殖的抑制作用研究論文杜文琪張南征馬文青【摘要】目的觀察奧曲肽(octreotide，OCT)對人胃癌細胞多種生物學行為的抑制作用，并探討部分機制。方法MTT比色分析法測定OCT對胃癌細胞系MKN45生長的影響，流式細胞術檢測細胞周期的改變，平板集落實驗觀察細胞集落形成能力，裸鼠移植瘤形成實驗體內(nèi)觀察OCT對胃癌的作用，放免法觀察OCT對細胞因子生長抑素（epidermalgroinggrool/L作用最強；OCT誘導腫瘤細胞發(fā)生G0/G1期阻滯，以OCT作用24h時最明顯；OCT可顯著抑制細胞的集落形成能力，并顯著抑制裸鼠移

2、植瘤的形成。OCT作用后細胞分泌EGF、TGF-α的量均明顯減少。結論OCT在體內(nèi)、體外均能有效抑制胃癌細胞MKN45的生長,可作為胃癌輔助治療手段之一?！娟P鍵詞】胃腫瘤；生長抑素；細胞周期；生長抑素；轉化生長因子-αAbstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofsomatostatinanalogueoctreotide(OCT)onthegroechanism．MethodsTheeffectofOCToncellproliferationinvitroinedbyMTT.Cellcycleetry.

3、PlatecolonyformationassayinetheabilityofcolonyformationofMKN45cells.TumortransplantationinnudemiceedtoobservetheeffectofOCTongastriccancerinvivo.ThecontentsofepidermalgroinggroediaeasuredbyRIA.ResultsThegroannerandostpotentattheconcentrationof10-6mol/L．OCTarrestedthecellcycl

4、eatG0/G1phraseandreducedcolonyformation.TherepressionpotentialofOCTonthegroiceediaofMKN45cellsaybeapromisingadjuvanttherapyforgastriccancer.Keyatostatin；cellcycle；epidermalgroinggrog/支，瑞士諾華制藥)，RPMI1640培養(yǎng)基(Gibco)，胎牛血清(杭州四季青公司)，胰蛋白酶、Propidiumiodide（PI）、3-（4，5-dimethylthiazol-2

5、-YL）-2，5-diphenyltetrazoliumbromide（MTT）(Sigma)，生長抑素(EGF)RIA試劑盒(北京華英放射免疫技術研究所)、轉化生長因子-α(TGF-α)RIA試劑盒（中國人民解放軍總醫(yī)院放免研究所）。1.2細胞培養(yǎng)人胃癌細胞株MKN45生長于含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，內(nèi)加青霉素100×103U/L，鏈霉素100mg/L，37℃、5%CO2濃度及飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)。細胞呈單層貼壁生長，每3～4天以0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA（1∶1）消化液消化傳代。1.3MTT比色分析法對數(shù)生長

6、期的MKN45細胞消化后調(diào)整細胞密度為1×105/ml，接種于96孔板，每孔100μl，另加培養(yǎng)基100μl。37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24h后，更換無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h分組：設空白組（不加細胞）、對照組（不加藥）、OCT組（分為10-6、10-7、10-8、10-9mol/L4個濃度），每組6個復孔。繼續(xù)培養(yǎng)72h，每24h更換新鮮培養(yǎng)基和奧曲肽。終止培養(yǎng)前4h加入MTT40μl/孔，避光孵育。結束培養(yǎng)時，吸去全部上清液，加入DMSO200μl/孔，微孔板震蕩器震蕩10min，酶聯(lián)檢測儀上測定光密度（D）值（λ=550nm）。按下列公

7、式計算細胞抑制率：抑制率=［（對照組D值-空白組D值）-（實驗組D值-空白組D值）］/（對照組D值-空白組D值）×100%1.4平板集落形成實驗對數(shù)生長期的MKN45細胞消化后吹打成單細胞懸液。將1000個細胞接種于含液體培養(yǎng)基的普通平皿中(平皿直徑為9cm)，分設對照組（不加藥）和OCT組（培養(yǎng)基中加新鮮OCT，濃度為10-6mol／L），37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)至細胞形成典型集落；以包含50個以上細胞為一個集落進行計數(shù)，普通平皿中的細胞經(jīng)固定、蘇木精-伊紅染色、倒置顯微鏡下計數(shù)細胞集落。1.5流式細胞技術檢測細胞周期對數(shù)生長期的MKN4

8、5細胞消化后調(diào)整細胞密度為1×105/ml，接種于50ml培養(yǎng)瓶，每瓶2ml。無血清培養(yǎng)基同步化24h后分組，設0、6、12、24、36、48h共計6